Полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР) діагностика: що це таке

В сучасному світі існує безліч способів виявити збудників захворювань на різних етапах розвитку захворювання. Одним з таких методів є PCR (метод ПЛР або полімеразна ланцюгова реакція), що дозволяє виявити інфекцію на самому ранньому етапі. Буквально одна одиниця ДНК або РНК вже можуть вказати на наявність того чи іншого збудника в організмі при належному рівні підготовки пацієнта і професіоналізму лаборантів медичного закладу.

ПРЦ-дослідження, що це таке?

Аналіз на ПЛР полягає в копіюванні ДНК і РНК збудника в лабораторних умовах. Через те, що основним сховищем генетичної інформації є ДНК (дезоксирибонуклеїнова кислота), утворена 2 нитками, з’єднаними нуклеотидами, саме при множині копіюванні (синтезі) цієї кислоти можна встановити наявність патогенного організму, якщо мова йде про бактерії.

Бактерії мають свою власну оболонку, що захищає їх від зовнішнього середовища, яка нерідко є агресивною по відношенню до останніх. У вірусів же немає власної оболонки (у деяких представників є щось схоже на оболонку), а інформацію в собі несе не ДНК, а РНК (РНК).

РНК влаштовані таким чином, що вони вбудовуються в ланцюзі ДНК організму-переносника і змінюють їх, дозволяючи проникати в клітини і жити внаслідок організму. Грубо кажучи, бактерії і віруси залишають «відбитки» своїми ДНК і РНК, які і виявляє аналіз ПЦР. Ці «відбитки», як і відбитки пальців, є унікальними для кожного збудника. Тому ПЛР дозволяє виявити захворювання на будь-яких етапах, навіть якщо розвиток патогенна відбувається безсимптомно.

До широкого впровадження ПЛР в гінекології і урології на ІПСШ широко використовувалися методи:

• мікроскопія – забарвлені і нефарбовані препарати досліджуються через мікроскоп. Метод дуже зав’язаний на досвідченості лаборанта. Таким методом добре виявляються бактерії, що мають великий розмір(гарднерели, кандиди, трихомонади, гонококи);
• бактеріологія – метод полягає у вирощуванні збудників інфекції на живильному агарі, ідентифікації збудника і визначення чутливості його до антибіотиків. Довгий час вважався «золотим стандартом». До мінусів відносять необхідність швидкого доставлення матеріалу в КДЛ (клініко-діагностична лабораторія), терміни вирощування і з’ясування чутливості до груп антибактеріальних препаратів (як правило, 5-7 діб);
• імуноферментний аналіз – Визначення антитіл організму, що виникають у відповідь на впровадження антигену збудником інфекції. З плюсів варто відзначити можливість визначення стадії захворювання (гостра стадія супроводжується наявністю IgG в сироватці крові, хронічна – IgM.) До мінусів відноситься неможливість визначення у людей з ослабленим імунітетом, а також специфічність ІФА. Іншими словами, при наявності тільки результату імуноферментного аналізу, неможливо було виставити діагноз, а можна було тільки визначити, що організм бореться з якою-небудь інфекцією.

Як відбувається здача аналізів на ПЛР

Залежно від матеріалу, який забирається для проведення аналізу ПЛР, існує кілька обов’язкових правил для пацієнта. Кров здається строго натщесерце вранці. Сечу теж варто здавати вранці, першу порцію. Мокрота також здається натщесерце, хоча це і не є обов’язковим. Мазки здаються в будь-який час доби і мають специфічні вимоги. Мазок з ротоглотки також слід здавати вранці до приймання їжі.

Забір матеріалу проводиться сертифікованим фахівцем стерильними одноразовими інструментами. Беруть аналіз крові на ПЛР одноразовим стерильним шприцом, з вени забирають приблизно 1-2 мл венозної крові для виявлення таких інфекцій як герпес або ВПЛ (вірус папіломи людини). Сечі досить 10 мл, мокротиння – субстанції, розміром з сірникову головку.

Для кожного виду аналізу ПЛР існують свої вимоги:

• кров, як говорилося вище, забирають з вени натщесерце;
• сечу слід здавати вранці, першу порцію. Але, якщо паркан є терміновим, то досить здати сечу після 2 годин після останнього сечовипускання. Це дозволить інфекції набрати необхідну критичну масу на 1 мл для більш простого виявлення патогену;
• як беруть зішкріб з уретри. Насамперед обробляють розчином NaCl 0.9% зовнішній отвір уретри. Потім, здійснюючи циркулярні руху, зонд проводять на 2-4 см в уретру. Головку зонда, яка має щетинисту будову відсікають і кладуть в пробірку зі спеціальним розчином (своєрідний живильний агар для бактерій);
• з піхви виробляють мазок. Попередньо прибирають секрет бартолінових залоз, потім з заднього нижнього склепіння піхви спеціальної ватною паличкою відбувається забір матеріалу. При видимих патологічних змінах в піхву мазок слід брати безпосередньо на пошкодженій ділянці;
• як проводять зішкріб з цервікального каналу у жінок. Видаливши слиз із зовнішніх статевих шляхів, зонд на 0,5 – 1,5 см вводять в шийку матки, роблять циркулярний рух і, не торкаючись стінок піхви, видаляють зонд з статевих шляхів. Потім здійснюють дії, аналогічні зішкріб з уретри;
• з ротоглотки паркан відбувається натще. Притримуючи кінчик язика, зондом виробляють мазок з задньої стінки глотки, по мигдалинам або по піднебінним дужкам. Чи не стикаючись зі слизової оболонки ротової порожнини і зубами, зонд виводиться і відправляється на ПЛР-дослідження;
• з кон’юнктиви, попередньо очистивши фізіологічним розчином гнійні виділення, виробляють зішкріб слизової нижньої повіки від латерального до медіального краю. Повіка при цьому притримується медичним працівником, щоб уникнути зіткнення зонда зі слизової оболонки ока і віями.

Підготовка до дослідження

Аналіз на ПЛР є найшвидшим і перевіреним способом на ранніх етапах виявити інфекцію, але бувають і хибнопозитивні / помилково негативні результати.

Для збереження нервової системи як своєї, так і співробітників медичного закладу, слід правильно підготуватися до дослідження.

Підготовка до ПЛР у чоловіків

Перед дослідженням ПЛР чоловікам слід пам’ятати, чого робити не можна:

• мочитися за 3 години до дослідження;
• виробляти спринцювання і стерильну обробку члена;
• мити член милом, що містить антибіотик;
• займатися сексом за дві доби до ПЛР на ІПСШ;

Підготовка до ПЛР в гінекології

Жінкам перед тим як здати мазок на ПЦР заборонено:

• при соскобі з уретри заборонено мочитися за 3 години до дослідження;
• використовувати вагінальні розчини з дезинфікуючими властивостями;
• за дві доби до дослідження застосовувати супозиторії для піхви;
• використовувати антибіотики місцево, в тому числі й мило з антибіотиком;
• заняття сексом за 48 годин до дослідження;
• застосовувати антибіотик всередину піхви і уретри;
• спринцюватися;
• приймати антибіотики. Після останнього приймання антибактеріального препарату має пройти не менше 4 тижнів;
• здавати ПЛР під час менструації.

Загальні відомості при дослідженні сечі для чоловіків і жінок

Слід здати на аналіз першу сечу вранці, її середню порцію. Іншими словами починати мочитися слід в унітаз. Потім зупинити акт сечовипускання, підставити під уретру баночку для збору сечі, продовжити мочитися протягом 2-3 секунд, потім знову зупинити сечовипускання і, прибравши контейнер, закінчити акт сечовипускання в унітаз.

Жінкам і чоловікам перед тим як здати ПЛР слід добре вимити зовнішні статеві органи для унеможливлення потрапляння в сечу смегми (суміш секрету сальних залоз крайньої плоті) і виділень з піхви.

Баночка для сечі повинна бути стерильною. Попросіть контейнер в клініці, де ви здаєте аналіз, або заздалегідь приготуйте баночку з щільно закривається кришкою і прокип’ятіть їх не менше 10 хвилин.

Безпосередньо перед здачею ПЛР заборонено:

• мочитися (необхідна найперша порція сечі за день);
• змінювати кількість випитої за добу до дослідження рідини. Це необхідно, щоб підтримувати звичайний водно-електролітний баланс організму, в якому себе комфортно почуває потенційний збудник інфекції;
• використовувати уросептики;
• застосовувати мило, що містить в собі антибіотик;
• займатися сексом за 12 годин до дослідження;
• при менструації бажаний забір сечі уретральним катетером для унеможливлення потрапляння крові в контейнер з сечею;

Якщо один з пунктів був порушений:

Слід утриматися від проведення діагностики інфекцій методом ПЛР. Якщо ж все-таки аналіз був зданий, слід його повторити через дві доби. Якщо при використанні антисептиків і антибіотиків результат виявився «хорошим» – не варто радіти. Швидше за все, при наявності певних скарг, це хибнопозитивний результат.

Розшифровка результатів ПЛР

Розшифровка аналізів ПЛР дуже просто. Існує позитивний і негативний результати дослідження. Позитивний означає, що інфекція в організмі є, але це не повинно наводити страх на пацієнта. Навпаки, це означає, що тепер можна почати лікування і вчасно зупинити патоген. Негативний результат, відповідно, показувати відсутність інфекції в організмі.

Також не варто забувати про хибнопозитивних / помилково негативні результати. У медицині золотим стандартом є три однакових результату поспіль в незалежних клініках. Варто пам’ятати, що в різних клініках сама КДЛ (клініко-діагностична лабораторія) може бути одна. Тобто, будівлі і назви будуть різні, але всі аналізи відправляються в одну лабораторію, яка б пов’язала ці клініки. Тому, отримавши результат в одній клініці, для того, щоб упевнитися в правильності даного результату, варто звернутися ще в дві клініки і дізнатися, чи не здають вони результати в одну і ту ж КДЛ.

Широкий спектр досліджень

Метод ПЛР відноситься до групи великих аналізів. За допомогою ПЛР аналізу можна визначити практично будь-яке захворювання. На жаль, це не найдешевший метод дослідження, тому його не призначають всім пацієнтам поголовно. Ціни можуть варіюватися в залежності від клініки та кількості досліджень.

Існує полімеразна ланцюгова реакція (аналізи ПЛР) на 12 інфекцій. Які інфекції входять в ПЛР 12:

• мікоплазми геніталій (mycoplasmagenitalium)і гомініс (hominis);
• трихомонади (trichomonas);
• хламідії (chlamydia trachomatis);
• уреаплазми (ureaplasma, що включає ureaplasma parvum (уреаплазми парвум);
• кандиди (candida);
• гарднерели (gardnerellavaginalis);
• гонокок (neisseria gonorrhoeae);
• антитіла IgG, IgM;
• герпесу двох типів.

Також є спрощена ПЛР 6 діагностика. Вона виключає уреаплазму парвум, кандиди, гонокок, IgG, IgM, герпес обох типів.

ПЛР дослідження на ВІЛ

ПЛР на ВІЛ слід виділити окремим пунктом, через те, що тут існує специфічний набір обмежень.

По-перше, ПЛР на ВІЛ визначає не ДНК вірусу імунодефіциту людини, а ДНК зміненої вірусом клітини-лімфоцити. У ньому буде зберігатися інформація про вірус і розмножуватися, створюючи все більше уражених лімфоцитів.

Здавати аналіз слід через 14 діб після відомого контакту з ВІЛ-інфікованою людиною. Варто пам’ятати, що заразність цього вірусу дещо перебільшена через важкість нелеченного захворювання. Якщо стався контакт через кров, то тут шанс заразитися найвищий, проте і він не перевищує 85%. При інших контактах ймовірність зараження становить від 1% до 10%.

При дослідженні ПЛР на ВІЛ ймовірність хибнопозитивного результату становить близько 2%, а то й було порушень серед медичного персоналу (правильно маркована пробірка, чи не переплутали пробірки місцями, не було забруднення матеріалу при розтині пробірки).

Тривалість ПЛР може становити від 4 годин до 7 діб, в залежності від організованості медичного закладу, де відбувається діагностика інфекцій.

Плюси і мінуси ПЛР

При зображенні плюсів ПЛР слід зазначити:

• чутливість. Як говорилося вище, навіть одиничний агент, залишений збудником, дозволяє виявити інфекцію на її ранній стадії або якщо вона протікає приховано;
• широкий спектр. Наприклад, ПЛР 6 дозволяє 1 дослідженням виявити цілих 6 збудників;
• точність. Помилкові результати при цьому методі дослідження мають місце бути, але їх кількість зведена до мінімуму;
• швидкість. Як правило, пацієнт уже на наступний день може забрати готовий результат ПЛР дослідження.

Мінуси:

• вартість. ПЛР-дослідження не включено в список досліджень в системі ОМС. Дороге високоточне обладнання вимагає оплати своєї роботи;
• вимоги до дотримання техніки дослідження і до професіоналізму співробітників;
• вимоги до підготовки.